影片講述了新生代蜘蛛俠邁爾斯（沙梅克·摩爾 Shameik Moore 配音）攜手蜘蛛格溫（海莉·斯坦菲爾德 Hailee Steinfeld 配音），穿越多元宇宙踏上更宏大的冒險征程的故事。面臨每個蜘蛛俠都會失去至親的宿命，邁爾斯誓言打破命運魔咒，找到屬於自己的英雄之路。而這個決定和蜘蛛俠2099（奧斯卡·伊薩克 Oscar Is aac 配音）所領軍的蜘蛛聯盟產生了極大衝突，一場以一敵百的蜘蛛俠大內戰即將拉響！